RESUMO A cotonicultura tem forte fator de impacto na economia nacional, e o estado de Mato Grosso se destaca por ser o maior produtor de algodão herbáceo e deter o maior rebanho bovino do país, condições essas que estimulam o uso do caroço, da torta e do farelo de algodão na alimentação animal. Considerando que o gossipol está presente nos subprodutos do algodão e que seus efeitos sobre a reprodução podem reduzir a fertilidade dos animais, objetivou-se, com essa pesquisa, avaliar o efeito da ingestão de dietas com diferentes teores de gossipol livre por dia sobre a morfometria testicular e a qualidade seminal de touros da raça Nelore. Foram utilizados 28 touros, distribuídos aleatoriamente em seis tratamentos: T0, 0 grama de gossipol livre/touro/dia ; T1, 1,08 grama de gossipol livre/touro/dia; T2, 2,07 gramas de gossipol livre/touro/dia; T3, 3,24 gramas de gossipol livre/touro/dia; T4, 3,82 gramas de gossipol livre/touro/dia e T5, 5,08 gramas de gossipol livre/touro/dia. Os animais de cada tratamento foram mantidos confinados em área média de 100m2, dotada de bebedouro, cochos para mistura mineral e para volumoso/concentrado. O consumo de 3,24 gramas de gossipol livre/touro/dia alterou a qualidade espermática e a morfometria testicular de touros.

ABSTRACT The cotton industry has a strong impact factor in the Brazilian economy and the state of Mato Grosso stands out for being the largest upland-type cotton producer and also holds the largest cattle herd in the country, conditions that stimulate the use of cottonseed pie and cottonseed meal in animal feed. Whereas gossypol is present in cotton by-products and their effects on reproduction can reduce the animal fertility, this research evaluated the effect of diets with different free gossypol contents in the testicular morphometry and semen quality of Nelore bulls. 28 bulls were randomly distributed in six treatments: T0, receiving no free gossypol; T1, receiving 1.08g / bull / day; T2, receiving 2.07g / bull / day; T3, receiving 3.24g / bull / day; T4, receiving 3.82g / bull / day and T5, receiving 5.08g / bull / day of free gossypol respectively. The animals in each treatment were kept confined in an averaged area of 100m2, having fresh water, troughs for mineral mixture and roughage / concentrate. The consumption of 3.24g of free gossypol / bull / day altered the bulls sperm quality and testicular morphometry.

RESUMO O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da somatotropina recombinante bovina (rbST) sobre a sobrevivência e o diâmetro de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) bovinos cultivados in vitro. Ovários foram coletados de vacas adultas e fragmentos do córtex ovariano foram imediatamente fixados (controle não cultivado) ou cultivados in vitro em α-MEM + sozinho ou contendo 10, 50, 100 ou 1.000ng/mL de rbST. Os fragmentos foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Após um e sete dias de cultivo, o percentual de folículos normais no controle não cultivado foi superior (P<0,05) aos cultivados em α-MEM + sozinho ou acrescido de diferentes concentrações de rbST. Os diâmetros médios oocitário e folicular não aumentaram durante o cultivo por um e sete dias, tanto nos meios contendo rbST, como no meio sem esse hormônio (α-MEM + ). O único meio em que não houve redução no diâmetro folicular com o tempo de cultivo foi o sem rbST. Verificaram-se ainda danos ultraestruturais em FOPA cultivados in vitro. Conclui-se que o uso de rbST em diferentes concentrações no cultivo in situ de folículos pré-antrais bovinos não tem efeitos benéficos na sobrevivência e no crescimento de FOPA bovinos.

ABSTRACT The aim of this study was to evaluate the effect of Recombinant bovine somatotropin (rbST) on survival and diameter of bovine preantral ovarian follicles (PAOF) cultured in vitro. Ovaries were collected from adult cows and fragments of ovarian cortex were immediately fixed (non-cultured control) or cultured in vitro in α-MEM+ alone or containing 10, 50, 100 or 1,000ng/mL rbST. The fragments were processed for Classical Histology and Transmission Electron Microscopy. After one and seven days of culture, the percentage of normal follicles in the non-cultured control was superior (P< 0.05) to the follicles cultured in α-MEM+ alone or with different rbST concentrations. The oocyte and follicular mean diameter did not increase during the culture for one and seven days, both in media containing rbST and in the medium without this hormone. The only medium in which there was no reduction in follicular diameter with the time of culture was the medium without rbST. Ultrastructural damage in PAOF cultured in vitro was found. It is concluded that the use of rbST at different concentrations in in situ culture of bovine preantral follicles has no beneficial effects on survival and growth of bovine PAOF.

RESUMO Sarcoma de tecidos moles (STM) compreende um grupo heterogêneo de neoplasias malignas, derivadas de tecidos extraesqueléticos, que podem apresentar alterações histopatológicas similares. Os padrões histopatológicos sugestivos de tumor de parede perivascular (TPP) e de tumor de bainha de nervo periférico (TBNP) têm sido descritos. Este estudo investigou a histogênese de uma série de 71 STM caninos, que apresentavam compatibilidade morfológica com o que é descrito para TPP e TBNP. A análise imuno-histoquímica foi feita para CD56, S100, SMA, Desmina, Fator Von Willebrand, NSE e GFAP. Vinte e um casos (29,6%) apresentaram características histopatológicas compatíveis com TPP, 23 casos (32,4%) com TBNP e 27 casos (38,0%) apresentaram características histopatológicas de ambos. Na imuno-histoquímica, 59 (83,1%) casos apresentaram positividade somente para marcadores neurais e 12 (16,9%) tiveram positividade simultânea tanto para marcadores neurais como para marcadores musculares. TBNP foi a neoplasia mais prevalente e nenhum dos casos foi positivo para somente para marcadores musculares. As características histopatológicas não foram úteis para definir o diagnóstico de TPP, uma vez que a maioria foi negativa para marcadores musculares, mas positiva para marcadores neurais. Devido a essa imunorreatividade e às características morfológicas, pesquisas futuras poderão propor orientações para a classificação dessas neoplasias.

ABSTRACT Soft tissue sarcomas (STS) comprise a heterogeneous group of malignancies derived from extra-skeletal mesenchymal tissues that may show similar histopathological changes. Histopathologic patterns suggestive of perivascular wall tumors (PWT) and peripheral nerve sheath tumors (PNST) have been described. This study investigated the histogenesis in a series of 71 cases of canine STS that showed morphological compatibility with what is described for PWT and PNST. Immunohistochemistry analysis were done to CD56, S100, SMA, Desmin, Von Willebrand Factor, NSE and GFAP. Twenty-one cases (29.6%) showed histopathologic features compatible with PWT, 23 cases (32.4%) with PNST and 27 cases (38.0%) shared both histopathological features. By immunohistochemistry, 59 (83.1%) cases showed positivity only for neural markers and 12 (16.9%) had simultaneous positivity for both neural and muscle markers. PNST was the most prevalent neoplasm and none of the cases were positive for muscle markers only. The histopathologic features were not useful to define the diagnosis of PWT, since most tumors were negative for muscle markers but positive for neural markers. Due to this immunoreactivity and the morphologic features, future studies may propose guidelines for the classification of these neoplasms.

RESUMO No presente estudo, utilizou-se a melatonina e a proteína específica do oviduto (pOSP) nos meios de maturação in vitro. Foram avaliadas a expansão do complexo cumulus-ovócito (CCOs), as concentrações intracelulares de espécies reativas de oxigênio (ROS) e o desenvolvimento embrionário nos diferentes grupos (C = controle; T1 = somente com melatonina; T2 = com melatonina e pOSP e T3 somente com pOSP). No tocante à expansão do CCOs, houve diferença (P<0,05) dos valores obtidos no grupo C em relação aos valores médios dos grupos T1, T2 e T3, porém não houve diferença entre os valores obtidos nos tratamentos (P>0,05). Na dosagem de ROS, não houve diferença entre os valores médios obtidos no grupo C (26,4±10,9) e o valor verificado no grupo T1 (23,4±7,8), porém no grupo T2 (21,3±9,7) o valor médio mostrou-se satisfatório em relação ao valor do grupo C. No entanto, o valor médio do grupo T3 (16,6±10,5) foi o que demonstrou resultado mais satisfatório quando comparado aos demais grupos (P<0,05). A produção de embriões foi avaliada por meio da taxa de clivagem. Não houve diferença (P>0,05) entre os valores obtidos entre o grupo C (48,9 %) e os valores verificados nos grupos T1 (51,5 %), T2 (50 %), T3 (57,7 %), nem destes entre si. Este estudo permitiu concluir que a proteína específica do oviduto recombinante e a melatonina foram eficientes em melhorar a expansão dos CCOs. Além disso, as células tratadas com pOSP mostraram-se com menor quantidade de ROS, podendo a pOSP ser considerada um antioxidante proteico.

ABSTRACT The present study used melatonin and recombinant oviduct specific protein (pOSP) in in vitro maturation medium (IVM). The expansion of the cumulus-oocyte complexes (COCs), the intracellular concentrations of reactive oxygen species (ROS) and embryo development of the different groups were evaluated (C = control; T1 = melatonin; T2 = melatonin and pOSP and T3 = pOSP). Regarding the COCs expansion, the groups T1, T2 and T3 showed satisfactory results compared with group C (P<0.05), but there was no difference between treatments (P>0.05). In the ROS dosage, there was no difference between the mean values obtained in group C (26.4 ± 10.9) and group 1 (23.4 ± 7.8). However, in group 2 (21.3 ± 9.7), the average value was found to be satisfactory in relation group C. Despite that, the average value of treatment 3 (16.6 ± 10.5) was the most satisfactory result found compared to the other groups (P<0.05). The production of embryos was evaluated by cleavage rate, there was no difference between the values obtained in group C and the values recorded in groups T1 (51.5 %), T2 (50 %), T3 (57.7 %), and among them. This study showed that the pOSP and the melatonin were effective in the improvement of the expansion of COCs cells. In addition, the cells that were treated with pOSP presented a lower amount of ROS, allowing the pOSP to be considered a proteic antioxidant.

Avaliou-se o efeito do soro de cadela em estro na maturação in vitro de ovócitos caninos, utilizando-se 92 ovócitos de cadelas, submetidas à cirurgia eletiva de ovarioisterectomia. Os ovócitos foram selecionados e distribuídos em dois tratamentos: T1 (n = 48), ovócitos cultivados in vitro durante 96 horas utilizando meio base - TCM199 + 5µg/mL de LH + 20µg/mL de FSH - mais 10% de soro inativado de vaca em estro e T2 (n = 44), ovócitos cultivados em meio base mais 10% de soro inativado de cadela em estro. O percentual de ovócitos observados em metáfase I não indicou diferenças (P>0,05) entre T1 (2,1%) e T2 (0,0%), porém a taxa de ovócitos maduros (metáfase II) foi diferente (P<0,05), sendo 27,1% em T1 e 47,7% em T2. O mesmo fato ocorreu com a taxa de cromatina condensada (P<0,01), com 14,6 e 0,0%, respectivamente. Nos ovócitos sem configuração cromossômica, não foram observadas diferenças (P>0,05), sendo 56,3% em T1 e 52,3% em T2. Estes resultados indicam que a adição de soro de cadela em estro no meio de cultivo oferece melhores condições para o desenvolvimento in vitro, quando comparado à de soro de vaca em estro.

This study aimed to evaluate the effect of estrus on in vitro canine oocyte. A total of 92 oocyte from bitches under ovary-hysterectomy surgery was used. The oocytes were selected and randomly assigned to two different treatments, being T1 (n = 48) in vitro cultured for 96h using basic medium (TCM199 + 5µg/mL of LH + 20µg/mL of FSH), plus 10% of cow inactive serum in estrus and T2 (n = 44) basic medium plus 10% of bitch inactive serum in estrus. The percentage of oocyte observed on metaphase I do not indicate a difference (P>0.05) between T1 (2.1%) and T2 (0.0%). However, the rate of mature oocyte (metaphase II) was different (P<0.05), being 27.1% for T1 and 47.7% for T2. There was difference (P<0.05) in the condensed chromatin rate for T1 (14.6 %) and T2 (0.0 %), respectively. There was no difference (P>0.05) between T1 (56.3%) and T2 (52.3%) in oocyte with no chromosome configuration. These results indicate that supplementation with estrus bitch serum on culture media offer better conditions to in vitro development, when compared to estrus cow serum.

Avaliou-se a eficácia de duas soluções de manipulação (SM) de embriões de camundongas nos estádios de blastocisto inicial (Bin), mórula compacta grau I (McI) e II (McII), distribuídos aleatoriamente em três tratamentos (T), de acordo com a solução de manutenção. No T1 usou-se PBS modificado (controle); no T2, SME e no T3, SME enriquecida. Os embriões foram mantidos durante quatro horas na solução de manutenção e posteriormente classificados quanto ao estádio de desenvolvimento e à qualidade embrionária. Logo após, foram cultivados em meio TCM 199 e classificados novamente quanto ao estádio de desenvolvimento e à qualidade embrionária. A taxa de desenvolvimento dos embriões após manutenção por quatro horas em solução de manipulação foi menor (P<0,05) nos embriões do controle, comparada à de embriões do SME e SME enriquecida, diferença esta não observada (P>0,05) após o cultivo in vitro. Os embriões McII do T3 tiveram maior desenvolvimento (P<0,05) em relação aos embriões do T1 e T2, indicando o efeito benéfico do enriquecimento da solução SME. Conclui-se que as soluções de manipulação SME e SME enriquecida influenciaram beneficamente o desenvolvimento de embriões

The effect of embryo manipulation solution followed by in vitro culture in mice embryos was studied. The embryos at early blastocyst (Bin), and compact morula grades I (McI) and II (McII) were randomly assigned into three treatments. T1 used modified PBS (control), T2 used EMS, and T3 used EMS supplemented. In each treatment, the embryos were kept in manipulation solution for four hours. Finishing the manipulation period, the embryos were classified according the development stage and quality. Following, the embryos were cultured in TCM 199. After the culture period, the embryos were evaluated according to quality and development stage. The development rate for Bin, McI, and McII after maintenance for four hours in manipulation solution was lower for control embryo (P>0.05) as compared to EMS and EMS supplemented embryos. After in vitro culture, no differences (P>0.05) on embryo development rate among control, EMS, and EMS supplemented were observed. Moreover, McII from EMS supplemented had a higher development (P<0.05) (93%) as compared to control (82.5%) and EMS (83.9%), suggesting a beneficial effect of EMS supplemented. EMS and EMS supplemented embryos had a positive effect on embryo development, showing higher embryo development than those in PBS solution

A simplified, fast, and innovative method was developed to count the total cell number in blastocysts. Murine blastocysts (N = 195) were used in this study. They were obtained after 10h culture of initial blastocysts, compact morulae grades I and II recovered from superovulated mouse. After culture, the blastococysts were selected to test the new proposal of counting. The process was done after embryo fixation in a sodium citrate solution, and adherence in glass slide. Following, the coloration was done using a fast panoptic coloration kit. As a result, it was possible to identify the blastomeres and count them in each blastocyst. This method provided a fast and effective analysis of the total cell number when compared with other techniques. Moreover, this new method shows advantages related to the cell visualization, which can be done in more simple equipment like stereoscopic microscope. Other interesting observed point was the long period of time and quality that the coloration stays on slides, considering other techniques.

Utilizaram-se 48 porcas primíparas, de genética PIC, com média de peso de 185,03±15,78kg, para avaliar diferentes níveis de energia digestível (3.350, 3.500, 3.650 e 3.800kcal/kg) na ração, durante a lactação (19,98±1,04 dias). Utilizou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado, com quatro tratamentos e 12 repetições, sendo a porca considerada a unidade experimental. O consumo total de ração não variou entre os animais dos tratamentos, sendo que as porcas consumiram em média 4,0kg de ração por dia. O consumo de energia digestível aumentou de forma linear, de acordo com o nível de energia na ração. Não se observou efeito do nível de energia da ração sobre a mobilização de reserva corporal, as características reprodutivas e o nível de insulina no soro das porcas. Observou-se aumento linear do ganho de peso dos leitões em função do consumo de energia das porcas. Conclui-se que porcas primíparas em lactação exigem 3.800kcal/kg de ração, correspondente a um consumo de 14.307kcal/dia.

Forty-eight primiparous sows (PIC), weighting in average of 185.03±15.78kg, were used to evaluate different levels of digestible energy (3,350; 3,500; 3,650 and 3,800 kcal/kg) during lactation (19.98±1.04 days). A completely randomized design was used with four treatments, 12 replicates, being the sow considered as the experimental unit. The sows were daily fed with 4.0kg of the experimental diet. Energy intake increased linearly, according to the level of digestible energy in the diet. The energy level in the diet did not affect the mobilization of corporal reserve, the reproductive characteristics and the levels of insulin of the serum of the sows. Weight gain of piglets and litter increased linearly, according to the dietary energy levels. It was concluded that primiparous lactating sows need to intake at least 14,307kcal/day.

Investigou-se a angioarquitetura venosa da genitália de fêmeas bovinas não prenhes, para avaliar a presença de possíveis anastomoses dos vasos provenientes da região da vulva e da vagina com a veia útero-ovariana, usando-se cinco peças obtidas em abatedouros. No laboratório, um ramo da veia vaginal caudal, infundido com contraste radiográfico intravascular, foi submetido à radiografia. Observou-se que a veia vaginal forma intensa rede de anastomoses na superfície ventral do útero, entre os antímeros direito e esquerdo. As genitálias apresentaram anastomoses dos vasos vulvares e vaginais com vasos da cérvice, corpo e cornos uterinos, sugerindo que parte de um agente luteolítico administrado via intravulvosubmucosa pode ser transportado diretamente aos ovários por uma rota local, sem atingir a circulação sistêmica.

The venous angioarchitecture of the non-pregnant female genital organs from five cattle obtained from a slaughterhouse was studied for possible anastomoses of the vulva and vagina vasa and the uterus-ovary vein, with the aid of the X-ray technique. In the laboratory, a branch of the caudal vaginal vein was injected with radiographic contrast. Vaginal vein formed and anastomotic network in the ventral surface of the uterus between the right and left sides. The genitals present anastomoses of the vulvar and vaginal veins with vasa of cervix, body and uterine horns and suggest that a portion of luteolytic agents injected through intravulvosubmucosal route can be transported directly to the ovary through a local route before reaching the systemic circulation.

Estudaram-se o efeito do tempo de avaliação da libido sobre a conduta sexual de touros e a atividade de monta em diferentes proporções touro:vaca e verificaram-se as possíveis correlações entre libido, circunferência escrotal e qualidade seminal. Vinte touros foram selecionados por meio de exame andrológico e teste da libido e distribuídos segundo as proporções touro:vaca: T1= 1:25; T2= 1:50; T3= 1:75; e T4= 1:100, com cinco repetições em cada proporção. O aumento no tempo de avaliação do teste da libido de 10 para 15 minutos reduziu o percentual de touros classificados como questionáveis e com libido boa e elevou o percentual de touros com libido muito boa e excelente. O tempo de 10 minutos interferiu negativamente no desempenho sexual dos touros. Das 1250 vacas utilizadas nos quatro tratamentos, 738 (59,0%) foram marcadas, sendo 624 (84,5%), 112 (15,2%) e duas (0,3%) marcadas por um, dois e três touros, respectivamente. As correlações entre libido e qualidade seminal e circunferência escrotal foram baixas.

The effect of time evaluation of bull libido on sexual behavior and the bull breeding activity for different bull:cow proportions were studied. Correlations between libido and scrotal circumference and sperm quality were estimated. Twenty selected bulls based on andrologic evaluation and on libido test were randomly allotted to four treatments in the following bull:cow proportions: T1= 1:25; T2= 1:50; T3= 1:75; and T4= 1:100. The increase in the time of the libido test from 10 to 15min reduced the percentage of bulls classified as questionable and good libido, and increased the percentage of bulls with very good and excellent libido. Ten minutes of libido test negatively affected sexual activity of the bulls. Out of 1250 cows from all treatments, 738 (59.0%) were marked, according to the following numbers: by one bull, 624 cows (84.5%), by two bulls, 112 cows (15.2%) and by three bulls, 2 cows (0.3%), suggesting that in a natural multibull breeding 45-day-season-system most of the cows are mated by only one bull. The estimated correlations between libido and sperm quality and scrotal circumference were low.

Avaliaram-se os efeitos da vitrificação de ovócitos imaturos de bovinos utilizando o etilenoglicol (EG) associado à trehalose e à polivinilpirrolidona (PVP). Utilizaram-se ovócitos provenientes de ovários de vacas abatidas em matadouro, distribuídos aleatoriamente em três tratamentos (T). TI - ovócitos não desnudados e não congelados, TII - ovócitos vitrificados com cumulus oophorus e TIII - ovócitos desnudados vitrificados. A percentagem de ovócitos recuperados e ovócitos com morfologia normal após a vitrificação foi diferente entre TII e TIII (92,2 e 72,6%; 79,0 e 63,6%, respectivamente). Os ovócitos normais foram cultivados à 38,5ºC em atmosfera de 5% de CO2 por 24 horas. Após o cultivo, os ovócitos foram fecundados e os embriões cultivados in vitro por sete dias. Foram encontradas diferenças entre tratamentos quanto às taxas de maturação nuclear, fecundação e clivagem (83,9, 70,0 e 44,0%; 17,5, 23,7 e 5,1%; 0,0, 0,0 e 0,0% para os tratamentos I, II e III, respectivamente). Apenas no TI foram obtidas mórulas e blastocistos (21,4%). Os procedimentos de vitrificação, segundo os protocolos utilizados, não são indicados para a criopreservação de ovócitos imaturos de bovinos.

This study aimed to evaluate the effects of vitrification procedure of immature bovine oocytes using ethylene glycol (EG) associated with trehalose and polivinylpyrrolidone on the percentage of recovered oocytes with normal morphology and nuclear maturation, fecundation and cleavage rates for in vitro cultivated embryos. Ovary oocytes of slaughtered cows were randomly allotted to three treatments (T): TI - oocytes neither undenuded nor vitrified, TII - vitrified oocytes with cumulus oophorus, TIII - undenuded vitrified oocytes. The percentage of recovered oocytes and oocytes with normal morphology after vitrification was different for TII and TIII (92.2 and 72.6%, 79.0 and 63.3% for TII and TIII, respectively). All normal oocytes were cultivated at 38.5ºC in atmosphere with 5% CO2 for 24 hours. After culture, the oocytes were fecundated and the embryos were cultivated in vitro for seven days. The nuclear maturation, fecundation and cleavage rates for TI, TII and TIII were different (83.9, 70.0 and 44.0%, 17.5, 23.7 and 5.1%, 0.0, 0.0 and 0.0% for TI, TII and TIII, respectively). Morulas and blastocysts were obtained only for TI (21.4%). These results indicate that the protocol used for vitrification procedure is not recommended for cryopreservation of immature bovine oocytes.

Estudou-se o efeito de dois meios diluidores, Tris-citrato-gema de ovo e Tes-Tris, sobre a qualidade espermática in vitro após criopreservação do sêmen de cães. Utilizaram-se três machos e realizaram-se cinco coletas em cada um deles. Foram avaliadas a motilidade, o vigor espermático, a integridade da membrana plasmática (teste hiposmótico), a integridade do acrossoma e a longevidade espermática (teste de termo-resistência). O meio diluidor Tris-citrato-gema de ovo foi superior (P<0,05) ao meio Tes-Tris por ter apresentado valores em torno de 15% mais altos após a congelação/descongelação do sêmen nos testes de termo-resistência e hiposmótico e nas avaliações da integridade do acrossoma, da motilidade e do vigor espermático

A study on two extenders on canine semen was performed, in order to evaluate their effects on in vitro characteristics of cryopreserved spermatozoa. The extenders studied were Tris-citrate and Tes-Tris. Semen from three stud dogs was collected weekly during five weeks for the experiment protocol. Semen samples were examined for sperm motility and forward progression, and plasmatic membrane and acrosome integrity using the hypo-osmotic swelling test and phase contrast microscopy, respectively, and semen longevity using the thermo-resistance test. A comparative analysis between the extenders has showed that Tris-citrate was superior (P<0.05) as compared to Tes-Tris based on the results of the hyposmotic swelling test, thermo-resistance test, sperm motility, forward progression and achrossome integrity after cryopreservation, all values 15% higher for the Tris-citrate

Estudou-se o efeito de dois protocolos de resfriamento do sêmen de cães sobre a qualidade espermática in vitro, após sua criopreservação. Utilizaram-se três machos e realizaram-se cinco coletas em cada um deles. Os procedimentos de resfriamento foram realizados em um congelador de células (biocool) e em caixa de isopor. Foram avaliadas a motilidade, o vigor espermático, a integridade da membrana plasmática (teste hiposmótico), a integridade do acrossoma e a longevidade espermática (teste de termo-resistência). A comparação entre os protocolos de resfriamento mostrou que não houve diferença (P>0,05) entre a caixa de isopor e o biocool logo após o resfriamento. Após a descongelação os resultados foram semelhantes entre os protocolos, observando-se diferença (P<0,05) apenas na motilidade espermática e no teste de termo-resistência (TTR), os quais foram superiores na caixa de isopor.

A study on cooling and equilibration procedures was performed in canine semen for evaluating the effects on in vitro characteristics of cryopreserved spermatozoa. Semen from three stud dogs was collected weekly during five weeks for the experiment protocol. The cooling systems were accomplished in a programmable cells freezer or in a polystyrene foam container. The evaluations employed were sperm motility and forward progression, and plasmatic membrane and acrosome integrity using the hypo-osmotic swelling test (HOS-T) and phase contrast microscopy, respectively, and semen longevity, using the thermo-resistance test. The comparative analysis of the cooling systems has showed that there was no difference (P>0.05) between the programmable freezer and the polystyrene container, immediately after cooling and equilibration times. Although after freezing and thawing the results of forward progression, HOS-T and acrosome integrity were equal for both cooling systems, best results for the motility and thermo resistance tests (P<0.05) were observed in the polystyrene container. The cooling rate in this system was of approximately -0.45° C/min and for the programmable freezer was of -0.55° C/min. The temperature fall was not constant in the polystyrene container and dropped faster in the beginning of the cooling time. It seems that this cooling rate at the polystyrene container favored the maintenance of spermatozoa energy sources. The tests results for both procedures were in agreement to the standard values for the freezing semen in dogs.

Estudaram-se os efeitos da concentração espermática e do tempo de incubação do sêmen com ovócitos, durante a fecundação in vitro, sobre as taxas de penetração espermática, de fecundação monoespermática e de clivagem, utilizando-se sêmen de touros da raça Gir. Ovócitos (n=817) maturados in vitro foram distribuídos em tratamentos visando à fecundação in vitro (FIV), em um delineamento fatorial 2×2×2, com duas concentrações espermáticas (2 e 4×10(6) espermatozóides/ml), dois períodos de incubação (12 e 18h) e dois touros (A e B). Espermatozóides viáveis foram obtidos pela técnica de swin-up. A FIV foi realizada em meio fert-talp com heparina, em incubadora com 5% de CO2 em ar atmosférico e 95% de umidade, a 39ºC. Após inseminação, 359 ovócitos foram fixados e corados para determinação das taxa de penetração e poliespermia. O restante foi co-cultivado com células da tuba uterina e TCM-199 por 72h, avaliando-se a clivagem. As taxas de penetração, fecundação monoespermática e clivagem não foram influenciadas (P>0,05) pela concentração espermática e pelo período de incubação. O touro B produziu maiores taxas (P<0,05) de penetração e de clivagem (83,3 e 81,0%, respectivamente) do que o touro A (66,5 e 64,0%). Houve tendência do touro B apresentar maior taxa de polispermia (P=0,067) do que o touro A (16,4 e 6,2 %, respectivamente). As interações entre tratamentos não foram significativas (P>0,05). O efeito touro sobre a capacidade de fecundação dos espermatozóides deve ser considerado quando da fecundação in vitro.

The aim of this study was to evaluate the effects of differents sperm concentration and incubation time during in vitro fecundation on sperm penetration, monospermic fecundation and cleavage rates, using sperm of Gyr bulls. In vitro matured oocytes (n=817) were distributed into treatments to in vitro fertilization (IVF) in a factorial design, with two sperm concentration (2 and 4×10(6) spermatozoa/ml), two incubation time (12 and 18h) and two bulls (A and B). Viable spermatozoa were obtained by swin-up. The IVF was realized in Fert-Talp medium with heparin, on incubator with 5% CO2 and 95% humidity in air, at 39ºC. After insemination, 359 oocytes were fixed and stained to determine penetration and polyspermy rates. The remainder were co-cultivated in bovine oviduct epithelial cells and TCM-199, for 72h, to evaluate cleavage rate. The penetration, monospermic fecundation, and cleavage rates were not affected (P>0.05) by sperm concentration and incubation time. Higher (P<0.05) penetration and cleavage rates were observed for bull B (83.3 and 81.8%, respectively) than for bull A (66.3 and 64%, respectively). Bull B showed a tendency to present higher (P<0.07) polyspermy than bull A (16.4 and 6.25, respectively). No interactions among treatments were observed.

Na tentativa de se estabelecerem condições de estocagem de embriões bovinos da raça Nelore, resfriaram-se 29 embriões em um contêiner modelo Celle modificado, por 24 horas a 5°C. Os embriões foram avaliados, classificados quanto ao estádio de desenvolvimento e qualidade embrionária, antes e após o resfriamento, e transferidos a receptoras sincronizadas à base de prostaglandina e progestágeno. Dos embriões resfriados, 82,8% (24/29) eram grau I, 13,6% (3/29) grau II e 6,9% (2/29) grau III. Após 24 horas de resfriamento, 62,1% (18/29) dos embriões continuaram grau I, 20,7% (6/29) grau II e 17,2% (5/29) grau III. Durante o resfriamento, todos os embriões permaneceram no mesmo estádio de desenvolvimento. Porém, dos embriões na fase de blastocisto inicial a blastocisto expandido, 82,8% (24/29) apresentaram colapso da blastocele. Após a transferência, obtiveram-se 37,9% (11/29) de gestação positiva, inferior (P<0,05) àquela apresentada pelo grupo-controle, de 75,6% (62/82). Possivelmente, o método de sincronização influenciou os resultados, obtendo-se apenas uma gestação positiva das 11 receptoras que receberam progestágenos.

In an attempt to establish good storage conditions for embryos of Nelore cows, 29 embryos were cooled in modified Celle model container during 24 hours at 5°C. Embryos were evaluated, classified and transferred to recipient heifers synchronized by prostaglandin and progestagen. Before cooling embryos were 82.8% (24/29) as level I, 13.6% (3/29) as level II and 6.9% (2/29) as level III. After a 24-hour period of cooling, 62.1% (18/29) of the embryos were level I, 20.7% (6/29) level II and 17.2% (5/29) level III. After the cooling process, all embryos were at the same stage of development as they were at the beginning of the process, however, 82.8% (24/29) of the embryos that were between blastocyst and expanding blastocyst stage showed a collapsed blastocoele. Transferred heifers showed that 37.9% (11/29) became pregnant, differing from heifers in the control group (75.6% - 62/82). The method used to syncronise the recipients, probably, has influenced this result, since only one became pregnant among the 11 recipients that received progestagen.